DWD-1 UV detektor (nagy teljesítményű dupla sugár dupla hullámhossz) beépített adatfeldolgozás

Dullámhosszú tartomány: 254 nm, 280 nm (egyidejű érzékelés), és a 254 nm, 280 nm-400 nm spektrális vonal között választható két hullámhossz egyidejű érzékelése.

* DWD-1 műszer jellemzői

A fehérje 280nm/254nm dupla hullámhossza meghatározása:

A fehérjemolekulák olyan aromás aminosavakat tartalmaznak, mint a konjugált kettős kötésű tirozin és a tranzin. Az ultraibolya fény felszívódásának tulajdonságai 280 nm hullámhosszon vannak, és az ebben a hullámhosszon belüli optikai sűrűség értéke pozitívan arányos a koncentrációjához, ezért a fehérje minősítésének és mennyiségi meghatározásának alapjául szolgálhat, ezért a 280nm ultraibolya felszívódási módszert általában a fehérje koncentrációjának folyamatos ellenőrzésére használják. Mivel azonban a különböző fehérjék tirozin és tranzin tartalma eltérő, a pontos mennyiség meghatározásához a vizsgálni kívánt fehérje tisztaságát kell összehasonlítani, vagy a fénycsökkentési tényezőjét már ismerjük hivatkozásként. Ezenkívül számos nem fehérje anyag is rendelkezik meghatározott felszívóképességgel 280 nm hullámhossz alatt, amely zavarokat okozhat. Különösen súlyosabb a nukleosav (purin és pirimidin) hatása. 280 nm-en 10-szer erősebb felszívódás (grammonként), mint a fehérjék, de a nukleinsav erősebb felszívódás 254 nm-en, amelynek felszívódási csúcsa 254 nm közelében van. A nukleínsav fénycsökkentési tényezője 254 nm-en kétszer annyi, mint 280 nm-en.

A fehérjék viszont a 280 nm ultraibolya felszívódási értéke nagyobb, mint a 254 nm felszívódási értéke.

Általában：

A tiszta fehérje fényfelvételi aránya: A280/A254” 1,8

A tiszta nukleinsav fényfelszívódási aránya: A280/A254 0,5

Ezért, ha a fehérjeoldatban ugyanakkor van nukleinsav (a legtöbb biológiai rendszer esetében), akkor az OD254nm és az OD280nm egyidejűleg meg kell mérni. Ezután a két hullámhossz felszívódásának aránya alapján kiszámítják a fehérje valódi tartalmát a nukleosav hatásának megszüntetése érdekében empirikus képletekkel.

Fehérjekoncentració: 1,45 x A280-0,74 x A254 (mg/ml)

Ez a tapasztalati képlet egy sor ismert különböző koncentrációs fehérjék (élesztő enoloráz) és nukleosav (élesztő nukleosav) keveréke által meghatározott adatok alapján jött létre.